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產品名稱：可編程變頻電源

產品品牌：KIKUSUI /菊水 

產品型號：PCR500L

菊水PCR500L變頻電源 新款熒光顯示供應二手日本菊水PCR500L變頻電源 新款熒光顯示型號PCR500L 500W變頻電源(日本菊水新款)

輸出電壓范圍：0到100和2到300 

輸出功率：50 

最大電流：5@100@200伏和軟件

輸出頻率范圍：1至999.9赫茲。

輸入：85到132伏交流電和170到250伏交流電，47至63赫茲 

尺寸：8.5“×16.9”×21.7“（217×430×550（毫米）

 重量：30KG

多功能交流穩壓電源（菊水）KIKUSUI PCR1000L類別：變頻電源FREQUENCY CONVERTER品牌：KIKUSUI ELECTRONICS （菊水）型號：PCR1000L［1000W變頻電源（日本菊水新款）］產品規格：W455＊D595＊H415mm，約49kg原產地：日本◆功能：√。基于高速線性放大器的高品位、高穩定和寬量程的輸出√。具備各類計測功能（電壓•電流的有效值•峰值、功率、有功功率、高次諧波電流簡易測定）√。不僅可以輸出AC，而且還可輸出DC，甚至是AC＋DC混合模式√。豐富的電源異常仿真功能√。柔性擴展性強，可望應用于電源環境測試和各類抗擾度試驗、功率放大任意信號發生器的輸出波形√。通過組合輸出擴展套件還可以輕而易舉地構建單相／單相3線或單相／三相切換系統。◆基本功能：高品位精確輸出／兼交流、直流的輸出／可調電壓輸出／可調頻率輸出／可調阻抗輸出／峰值設定／適用多種輸入／限值設定功能／保護功能／記憶功能／鎖定功能／同步功能／自檢功能◆擴展功能：產線模擬功能／特定波形輸出／自定義波形輸出／時序功能／相位差設定／諧波電流分析／阻抗輸出設定／電源因素峰值測定／交流直流混合模式／擴展記憶功能／傳感功能◆特點：電源異常仿真功能  測量瞬時壓降  測量諧波電流  諧波分析  彩色熒光顯示  進風散熱  兼交流、直流、混合模式輸出  自檢功能  限值設定功能  保護功能  記憶功能  ◆應用：√。電源環境測試√。諧波電源測試√。產線自動測試√。全球通用電源√。電磁干擾測試

同時有菊水變頻電源2KW、5KW、10KW

聯系電話：135 6451 5386  QQ： 1161399267 余先生

檢測方法： ELISA酶聯免疫法

說 明 書：隨貨發送，也可直接聯系在線銷售索取

測試種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、豬、雞、鴨elisa試劑盒等種屬

檢測目的：用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。

試劑盒保存及有效期：2-8℃,避光保存:6個月。

產品產地：進口/國產

產品庫存：

品牌：自主研發/進口原裝

產品價格：價格優惠，歡迎來電洽談！

試劑盒使用范圍：僅供科研檢測,不得用于臨床.

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ELISA試劑盒定性定量檢測一步到位，可同時大批量完成多種屬的檢測工作，而且一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本，正規專業的我們，一定能幫您，將實驗做得更好，更精確。試驗過程中，如有任何疑問都可和我們聯系，無論是售前、售中、售后我們都將始終如一，將優質服務進行到底。

本試劑盒僅供研究使用。

試劑盒組成

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

操作步驟

1.       根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

2.       加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品最終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

3.       配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

4.       洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。

5.       加生物素標記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘

6.       洗滌：操作同4。

7.       加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

8.       洗滌：操作同4。

9.       顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.   終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.   測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．  如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以稀釋倍數（×5×n）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

檢測范圍：0.312 mU/ml-20 mU/ml

靈敏度：0.078 mU/ml

規格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

關于ELISA試劑盒

ELISA試劑盒在國內有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到全世界科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發展。

Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測。

免疫測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應，所以任何優質的診斷試劑離不開優質的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現。

HBsAg試劑特點（檢測模式：臨床抗體夾心法）：包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應性。酶表抗體為與HBsAg有不同結合位點的鼠復合單位，可測得HBsAg變異樣品，提高檢測的特異性（99.98%）提高檢測的靈敏度，應用Parl Ehrich 學說（PEI）HBsAg標準品，對ad標準品的靈敏度為0.05ng/ml對ay標準品靈敏度為0.025ng/ml

ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結合物，經第二次孵育后，酶結合物就會與第一次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。

LISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。

然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優點。

特點：一、高效、靈敏、特異的抗體；　　二、穩定的重復性和可靠性；　　三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；　　四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型；　　五、節省實驗經費。

elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標液1PPM，就是1毫克/升，而作出標準數據為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%，這個與真實成分有密切的關系，說明方法的準確度。比如水中總無機氯含量測定，樣品水中含有無機氯20mg/L，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標準樣品，測定時忽略體積變化，如果測定出樣品中無機氯為2.98mg/L，則認為回收率為99%。

安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

5． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

6． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

10． 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

11． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

12． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

elisa試劑盒測試要求

做好對照

正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

實驗條件的選擇

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

檢測范圍和靈敏度不同，用量少時，可使用分裝，前期是它的長久性不是很好。

試劑盒的標準曲線最高點OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.10以下。

試劑盒的標準曲線相關系數R≥0.98。

試劑盒重復性好，板內、板間變異系數均<9 %。

試劑的組份都多給20%的富余量，確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。

檢測抗體及酶結合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作，保證實驗結果的重復性

ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據已經使用的結果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫學各領域的應用范圍日益擴大

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綿羊雄甾烯酮(ADT)ELISA試劑盒

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Sheep SSEA-3 ELISA kit羊階段特異性表面抗原-3(SSEA-3)ELISA試劑盒96T/48T

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Sheep leptin ELISA kit綿羊瘦素(leptin)ELISA試劑盒96T/48T

Mouse Immunoglobulin G,IgG Elisa Kit小鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒96T/48T

Human Surface Membrane Immunoglobulin,SmIg ELISA Kit人細胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA試劑盒 96T/48T

Human tissue inhibitor of metal protease 1,TIMP-1 ELISA Kit人基質金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒96T/48T

人可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)elisa試劑盒參數：

人可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)elisa試劑盒技術流程ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優點。

主要優點1、簡易操作、高效、靈敏、特異的抗體；2、穩定的重復性和可靠性；3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型；5、節省實驗經費。

使用方法1、 血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、 細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。5、 保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。操作步驟1：雙抗體夾心法1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。6.　結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。操作步驟2：間接法1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；2.次日洗滌3次；3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；5.37℃孵育30-60分鐘，洗滌；6.’最后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

標本要求1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

應用信息ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據已經使用的結果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫學各領域的應用范圍日益擴大，可概括四個方面：1、免疫酶染色各種細胞內成份的定位。2、研究抗酶抗體的合成。3、顯現微量的免疫沉淀反應。4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。編輯本段進口分裝進口分裝：檢測范圍和靈敏度不同，用量少時，可使用分裝，前期是它的長久性不是很好。試劑盒的標準曲線最高點OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.10以下。試劑盒的標準曲線相關系數R≥0.99。試劑盒重復性好，板內、板間變異系數均小于9 %。試劑的組份都多給20%的富余量，確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。檢測抗體及酶結合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作，保證實驗結果的重復性。白介素6是一種細胞因子,已被證實為B細胞分化因子.它是一種抗體形成系統,它的生理特性,如肝細胞急性蛋白合成的誘導和基于和白介素3協同作用的生長刺激等,也備受關注. 并且已證實白介素-6與病理學存在穩定的相關關系.例如,報道多種疾病的生長因子為白介素-6, 骨髓瘤細胞能合成白介素-6并表達白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性疾病和自身免疫疾病發揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測小鼠血清和細胞基質上清的白介素6 原理 此試劑盒運用了兩種特異性抗體,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強度與小鼠的白介素-6的量成正比. 檢測范圍 10.94  700 pg/mL [2]預期用途此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測試劑盒成分1 預包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T2 酶標記抗體: (30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 13 標準品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2 4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 15 標記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 16 顯色劑: TMB底物液 15mL x 17 終止液: 1N硫酸 12mL x 18 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標準品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標記抗體和顯色劑)[3]

注意事項1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔第一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。10.保存條件及有效期：1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 個月

熒光定量PCR檢測技術從誕生到現在已經有 8 年了，但是其應用在近四年才迅猛增長。在Medline 數據庫中，用“ Taqman” 或 ”real time PCR”作為關鍵詞檢索，在1996年僅有19篇，在1997年僅有28篇，在98 、 99 、2000 年分別達到了52 、157 、409篇， 2003年已經達到2984篇，相信在不久的將來會有更多的文章發表。針對實時 PCR 這一熱點領域，閃晶公司對它進行了深入細致的研究，并且及時地為廣大科研人員推出這項技術服務。

熒光定量PCR基本原理 •  Taqman 技術：該技術以美國 ABI 公司為代表。 PCR 擴增時，在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針。該探針為一直線型的寡核苷酸，兩端分別標記一個熒光報告基團和一個熒光淬滅基團，探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收， PCR 儀檢測不到熒光信號； PCR 擴增時（在延伸階段）， Taq 酶的 5＇ － 3＇ 外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條 DNA 鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與 PCR 產物形成完全同步，這也是定量的基礎所在。

相關鏈接......ABI公司Taqman探針MGB探針Sybr green I染料ROX染料Taq酶（熒光定量PCR專用）熱啟動酶熱啟動熒光PCR定量核心試劑盒熒光定量PCR一步法RT－PCR試劑盒TrizolRNA提取試劑UNG酶標準品克隆定點突變亞克隆dUTP

•  Beacon 技術：該技術以美國人 Tagyi 為代表。也是加入了熒光探針，但它是 環狀的寡核苷酸探針，分別由莖部和環部組成， 兩端分別標記 熒光報告基團和熒光猝滅基團，在無靶序列的情況下，探針始終是環狀，報告基團的熒光被猝滅基團猝滅，使熒光檢測儀檢測不到熒光信號；而在有靶序列時，即在 PCR 的退火階段探針與靶序列結合，使熒光報告基團和猝滅基團分開，這樣熒光儀可以檢測到熒光，熒光信號的強弱代表了靶序列的多少。

相關鏈接......分子信標知識介紹

•  FRET 技術：該技術以 Roche( 羅氏公司 ) 為代表。它的基本原理是：兩條直線型寡核苷酸探針，其中一條的 3 ‘端標記熒光激發基團，另一條的 5 ＇ 端標記熒光檢測基團，在無靶序列的情況下，兩條探針分開，無法進行能量的傳遞，這樣熒光儀不能檢測到熒光信號；而當有靶序列時，即在 PCR 的退火階段兩條探針與靶序列結合，使得兩條探針上的熒光基團可以進行能量的傳遞，這樣熒光儀就可以檢測到熒光信號，熒光信號的強弱代表了靶序列的多少。

實時熒光定量PCR中的幾個俗語 •  Ct 值：是指每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數。（如圖所示）

•  熒光域值（ threshold ）：是指 PCR 反應的前 15 個循環的熒光信號，熒光域值的缺省設置是 3-15 個循環的熒光信號的標準偏差的 10 倍，即： threshold.•  Ct 值與起始模板的關系：研究表明，每個模板的 Ct 值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系〔 1 〕，起始拷貝數越多， Ct 值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代 Ct 值（如圖 2 所示）。因此，只要獲得未知樣品的 Ct 值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。

熒光定量PCR應用廣泛 •  可以對各種基因的表達進行定量分析，如：同一基因在不同組織中的表達差異、同一基因在不同藥物處理后的表達差異、轉基因食品的檢測。過去最常用的高通量篩選基因表達差異的技術是 cDNA 芯片和差異顯示，但這兩種技術的缺點是只能定性而非完整意義上的定量分析。實時 PCR 技術和高通道實時 PCR 儀的出現，無疑為這種檢測提供了極大的方便。 •  可以進行點突變分析和等位基因分析，用不同的熒光報告基團標記 Taqman 探針，然后分別與野生型和突變型雜交，如果一種熒光信號明顯強于另一種熒光信號，則表明它是純合子；如果兩種熒光信號都明顯增強，則表明它是雜合子。另外分子信標（ Molecular Beacon）就是專門為這種技術設計的探針。 •  可以進行單核苷酸多態性的分析，檢測單核苷酸多態性對于研究個體對不同疾病的易感性或者個體對特定藥物的不同反應有著重要的意義，因分子信標結構的巧妙性，一旦 SNP 的序列信息是已知的，采用這種技術進行高通量的 SNP 檢測將會變得簡單而準確。 •  可以進行 DNA 甲基化檢測， DNA 甲基化同人類的許多疾病有關，特別是癌癥， Laird 報道了一種稱作 Methylight 的技術，在擴增之前先處理 DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影響，用特異性的引物和 Taqman 探針來區分甲基化和非甲基化的 DNA ，這種方法不僅方便而且靈敏度更高。 •  對傳染性疾病進行定量定性分析，這在我國應用比較廣泛，大家比較熟悉。許多生產臨床PCR 試劑的廠商已經陸續推出了一系列的診斷試劑，如：肝炎系列、性病系列、腫瘤系列等等。

熒光定量PCR技術服務  (含lncRNA熒光定量PCR-環狀RNA熒光定量PCR)熒光定量PCR用Taqman方法對DNA/RNA進行real time PCR的定量測定或型的鑒定。

熒光定量PCR服務要求1. 請您提供新鮮的且盡量多的材料(各種材料的RNA提取量請參照“總RNA 的提取”），或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/ 樣品）；（各種材料的DNA提取量請參照“ DNA的提取”），或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/ 樣品)。 2. 請通過E-mail提供已知的全長基因序列。3. 請提供盡可能詳細的背景資料：DNA/ RNA來源、豐度等

熒光定量PCR操作程序 1. 根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。 2. 提取DNA/RNA 。 3. Real Time PCR(熒光定量PCR)，進行實驗結果分析 4. 實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料 

熒光定量PCR收費標準 1、RNA提取：10－20個樣品的RNA提取是：150元/個；20－30個樣品的RNA提取是：120 元/個；30個以上樣品的RNA提取是：100元/個；每份材料最少應提供：100mg/樣品2、一個指標每個樣品為150元；二個指標每個樣品為240元；三指標每個樣品為300元，三個指標以上每個樣品為80元/反應。3、引物合成為每個堿基2.1元，探針標記為1200元/條，如果是用sybr green I(染料)做，則免去探針的費用，染料贈送。4、內參的GAPDH引物探針免費，標準曲線免費贈送。5、不再收取任何的基礎費或者開機費。

人（sEPCR）kit,可溶性血管內皮細胞蛋白C受體Elisa試劑盒本試劑僅供研究使用 Elisa kit規格：48孔配置/96孔配置標準品稀釋液：1.5ml×1瓶酶標試劑：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96） 

特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的，且與其他相關蛋白無交叉反應。有效期：6個月預期應用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中的含量。

人（sEPCR）kit,可溶性血管內皮細胞蛋白C受體Elisa試劑盒樣本處理及要求：1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

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